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检测亚硝酸盐含量的确定与方法验证
来源:网络 | 作者:pmo4563d9 | 发布时间: 2018-03-23 | 650 次浏览 | 分享到:
　　亚硝酸盐广泛存在于人类环境中，是自然界中最普遍的含氮化合物。人体内硝酸盐在微生物的作用下可还原为亚硝酸盐，N-亚硝基化合物的前体物质。外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。
　　据国际粮农组织1990年统计，人体所需的90%维生素C、60%维生素A均来自蔬菜，蔬菜提供人体所需维生素的同时，也提供了进入人体80%～90%的硝酸盐。选择以黄瓜为例的瓜类、以白菜为例的绿叶类、以茄子为例的茄果类蔬菜作为试材。
　　亚硝酸盐含量测定
　　一、溶液配制(GB5009.33-2010)
　　1、饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠(Na2B07·10H2O)，溶于100mL热水中，冷却后备用。
　　2、亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5·3H2O]，用水溶解，并稀释至1000mL。
　　3、乙酸锌溶液(220g/L)：称220g乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H2O]，先加30mL冰乙酸溶解，用水稀释至1000mL。
　　4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%(V/V)盐酸中，混匀后，至棕色瓶中，避光保存。
　　5、N-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐溶液(2g/L):称取0.2gN-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐，溶入少量水中后全部转移至100mL容量瓶中，加水至标线，混匀。置于棕色瓶避光保存。
　　6、亚硝酸钠标准溶液(100g/L):准确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水移入1000mL容量瓶，加水稀释至刻度，混匀。
　　7、亚硝酸钠标准溶液(10g/L)：临用前，吸取10mL亚硝酸盐标准溶液，置于100mL容量瓶，加水稀释至刻度。
　　所用试剂未注明均为分析纯，实验用水均为去离子水。所有实验用的玻璃仪器均用去离子水冼涤使其彻底干净，以确保无外来硝酸根离子(NO3-)和亚硝酸根离子(NO2-)的干扰。
　　二、标准曲线
　　采用国家标准(GB5009.33-2010)盐酸萘乙二胺法。配制一系列各浓度的亚硝酸盐溶液：取10ug/mL亚硝酸钠标准使用液0.00mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.60mL、2.00mL，分别置于50mL带塞比色管中。于标准管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，放置3-5min，加入1mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用2cm比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制亚硝酸盐的标准曲线。
　　根据标准曲线，采用下式计算亚硝酸盐含量，亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)：
　　式中：
　　X1——样品中亚硝酸盐的含量(mg/kg)；
　　M——样品质量(g)；
　　A1——测定用样液中亚硝酸盐的质量(μg)；
　　V0——样品处理液总体积(mL)；
　　V1——测定取样液体积(mL)。
　　三、回收率的测定
　　参考马巍(1999)[8]方法，采用加外标回收率的方式验证样品消解损失程度和方法的准确度。
　　四、精密度测定
　　配制10ug/mL亚硝酸盐标准溶液，移取0.8mL的该标准溶液于50mL比色管内，按照重氮化偶合法在538nm处重复测定标样7次，计算吸光度的平均值和标准平均偏差。
　　五、数据处理
　　对试验试数据采用Excel及SPSS 13.0统计软件处理。
　　结果与分析
　　一、标准曲线制作
　　由标准曲线(见图1)可知，标准工作曲线线性良好，不同浓度的亚硝酸盐在538nm处的吸光度是呈线性规律，其回归方程为y=0.6489x+0.0023，线性相关系数R=0.9997，相对系数在0.9995以上。
　　二、样品前处理条件确定
　　1、提取温度和水浴时间对亚硝酸盐检测结果的影响
　　不同提取温度和水浴时间对亚硝酸盐的影响检测结果见图2。
　　由图2可以看出，不同温度下溶液对亚硝酸盐的溶解量及提取速度存在差异，100℃时，水浴时间45min提取的亚硝酸盐含量最高；70℃时，水浴时间45min提取的亚硝酸盐含量最高，但两种温度相比70℃水浴下提取的亚硝酸盐含量更为高，因此提取亚硝酸盐的最佳水浴条件是70℃的水浴45min。
　　2、不同显色时间对亚硝酸盐检测结果的影响
　　不同显色时间对亚硝酸盐检测结果的影响测定结果(见图3)显色15min时，亚硝酸盐含量检出率最高，之后随着显色时间的延长，亚硝酸盐的吸光度变小，35min后虽稍有上升，但幅度不大。亚硝酸盐和显色剂反应可生成络合物，显色15min时，其吸光度最大。故宜选择15min作为显色时间。
　　3、活性炭对亚硝酸盐测定结果的影响
　　活性炭对亚硝酸盐含量的测定结果(见图4)可以看出，加入活性炭的试验组样品中亚硝酸盐检出值为3.50mg/kg，无活性炭的试验组样品亚硝酸盐检出值为1.00mg/kg，二者差异极显著。活性炭可消除抗坏血酸对亚硝酸盐测定的干扰，使得亚硝酸盐检出值更为准确。因此，宜选择加入活性炭处理，以提高检出率。
　　三、方法验证
　　样品亚硝酸盐回收率试验测定结果(见表1)表明，3个样品的亚硝酸盐回收率分别为91.11%、91.00%、102.00%，平均回收率为94.63%，相对平均偏差为5.1%。检出限数值越低，仪器和方法的灵敏度越高；内标回收率越高，仪器的准确度和精密度越高；外标回收率越高，消解损失程度越低，方法准确度越高。在运用分光光度法对样品进行测定时，通常需要测出所用方法的待测元素的回收率，以此评价方法的准确度和可靠性，回收率越接近1，则方法的可靠性越高。
　　由精密度试验测定结果(见表2)可见，通过重复测定标样七次和计算吸光度的重复性，亚硝酸盐的相对标准偏差为0.29%，小于2%，表明完全可满足试验精密度要求。
　　采用国标(GB5009.33-2010)盐酸萘乙二胺法测定蔬菜中亚硝酸盐，样品前处理的最佳条件是在70℃水浴45min，显色15min，加入活性炭进行消除抗坏血酸处理，平均回收率可达到94.63%，亚硝酸盐的相对标准偏差为0.29%，相对平均偏差为5.1%。